2
دانشیار گروه زراعت و اصلاح نباتات، دانشکده کشاورزی دانشگاه لرستان، خرمآباد، ایران
3
دانشیار بیوشیمی، دانشکده دامپزشکی دانشگاه لرستان، خرمآباد، ایران
چکیده
مقدمه:هیستامینازها (دیآمین اکسیداز) در پستانداران از جمله انسان، پوترسین، کادوارین، آگماتین و هیستامین را اکسید میکنند. هیستامیناز با منشاء گیاهی مخصوصاً خانوادهی لگومینوز نسبت به هیستامیناز جانوران عمل کاتالیزوری بهتر و سریعتری دارد. اخیرا هیستامیناز با منشاء گیاهی در ساخت دارو برای درمان بیماریهایی مختلفی نظیر شوک آنافیلاکسی قلبی، افت فشار خون، سردردهای عروقی، نقص در عملکرد روده، سرطان و غیره مورد استفاده قرار میگیرند. هدف از انجام این مطالعه جداسازی و همسانهسازی ژن کد کننده آنزیم هیستامیناز نخود به منظور بیان در گیاه و تولید پروتئین نوترکیب هیستامیناز گیاهی به مقدار فراوان میباشد. مواد و روشها:دراین مطالعه تجربی، از تعداد 5 جوانه سفید رنگ هفتروزه نخود تودهی محلی گریت،RNA ی کل استخراج و سپس با استفاده از آنزیم نسخهبرداری معکوس، cDNA تک رشتهای سنتز شد. در مرحلهی بعد، ژن هیستامیناز توسط آغازگرهای اختصاصی تکثیر و محصول PCR از ژل خالصسازی شد. در نهایت همسانهسازی در ناقلpTZ57RT با استفاده از روشهای مولکولی مرسوم مورد تائید قرار گرفت. یافتهها:در این تحقیق، cDNAی کدکنندهی آمینواکسیداز حاوی مس از نخود به کمک روشهای مولکولی جداسازی و همسانهسازی گردید. نتایج توالی یابی مشخص نمود که این cDNA دارای یک چهارچوب قرائت باز (ORF ) به طول 2013 نوکلئوتیدی بود و پروتئینی با 670 اسیدآمینه با وزن مولکولی7/75 کیلو دالتون را کد میکند . این توالی 99 درصد با نخود زراعی و 85 درصد با نخودفرنگی مشابه بود. نتیجه گیری:از ژن کدکنندهی آنزیم هیستامیناز با منشاء گیاهی برای تولید داروهای جدید استفاده میشود و با بیان آن در سیستمهای گیاهی میتوان مواد غذایی حاوی هیستامیناز تولید کرد و آنزیم بیان شده را در گیاه خالصسازی نمود.
